Penelitian ini bertujuan untuk menentukan struktur senyawa metabolit sekunder dari fraksi etil asetat daun Muntingia calabura L., dan menguji aktivitas antioksidannya. Metode dalam penelitian ini yaitu pemisahan dan pemurnian terhadap ekstrak etil asetat daun Muntingia calabura L. menggunakan berbagai teknik kromatografi, menghasilkan dua senyawa isolat. Hasil analisis data spektroskopi UV-Vis, 1H-NMR dan 13C-NMR menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi adalah 3,7-dimetoksi-5-hidroksiflavon(1) dan 3,7,8-trimetoksi-5-hidroksiflavon(2). Hasil uji antioksidan menggunakan metode DPPH menunjukkan nilai IC50 pada senyawa II secara adalah 65,01ppm (2) dimana senyawa (2) memiliki aktivitas antioksidan yang sedang.